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蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏,根据标本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。可使用适当的裂解液裂解细胞或组织样本。需要注意以下几个方面:
1.尽可能提取完全或降低样本复杂度只集中于提取目的蛋白(通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品);
2.保持蛋白处于溶解状态(通过裂解液的PH、盐浓度、表面活性剂、还原剂等的选择);
3.提取过程中防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等(低温操作,加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂);
4.尽量去除核酸、多糖、脂类等干扰分子(通过加入核酸酶或采取不同提取策略);
5.样品分装,长期于-80℃中保存,避免反复冻融。
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